荔园病理平台——TUNEL检测
TUNEL检测介绍
原理介绍
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。
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TUNEL检测（石蜡切片） |
取下适当的新鲜的组织块固定于4%-10%浓度的多聚甲醛或中性甲醛中，甲醛与组织块体积比在10:1和20:1之间，4摄氏度保存运输；
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TUNEL检测（冰冻切片） |
取下的新鲜组织应立即放入超低温冰箱或者液氮中，用干冰运输，固定好的切片应于-80或者-20度保存，并尽快用于检测；
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TUNEL检测（细胞爬片） |
细胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min，换PBS缓冲液4度保存运输，尽快用于检测；
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荧光法需要先拍一张凋亡荧光图，再拍一张原位染核图，再合并图层，最终我们提供的为三张荧光图片。
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