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荔园蛋白组平台——SILAC

SILAC介绍

SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术（Stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC），其基本原理是分别采用含有轻、中或重型同位素必需氨基酸的培养基培养细胞（用于SILAC的稳定同位素氨基酸主要有Lys和Arg），新合成的蛋白质即嵌合了同位素氨基酸，如此培养5-6代后，细胞的所有蛋白质均被同位素标记上。经处理因素刺激后，等量混合各类型蛋白质，然后经SDS-PAGE分离和质谱分析，通过比较一级质谱图中同位素峰型的面积大小进行相对定量，同时二级谱图对肽段进行序列测定从而鉴定蛋白质。

由于SILAC标记技术是体内标记技术，几乎不影响细胞的功能，同时灵敏度高，因此其在蛋白质组学相关领域中得到了广泛的应用，如比较蛋白质组学，蛋白质与蛋白质相互作用，蛋白质与DNA相互作用，蛋白质与RNA相互作用等领域。

SILAC技术的适用范围主要包括：定量蛋白质组分析，蛋白质实时表达动态研究，分子标志物鉴定等。研究领域涉及：多种生物学、医学的基础研究以及药物研发等方向。

荔园基因的SILAC服务可以实现细胞、动物水平的同位素标记，检测准确，实验重复性好。相对于荔园基因的iTRAQ服务，由于SILAC采用了体内同位素标记技术，其标记效率更高，定量更准确，是定量蛋白质组研究的首选。

技术原理

标记：在缺乏Lys和Arg的培养基中添加Lys和Arg的同位素培养细胞，使蛋白质被标记成“重型”； 
细胞处理，如药物处理等；
细胞裂解、提取蛋白质；
等量混合对照与处理组蛋白质、SDS-PAGE电泳、染色；
割取蛋白质条带，胰蛋白酶消化，质谱分析；
生物信息学分析。